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技术服务

TAP-MS(串联亲和纯化-质谱)

产品介绍【返回】

服务简介:
TAP/MS是由Co-IP/MS以及GST Pull down-MS发展而来,三者在寻找鉴定目标蛋白的相互作用蛋白的原理以及方法上非常相似,流程以及效果都要优于酵母双杂交方法。但是,TAP/MS方法经过两步亲和纯化,而Co-IP/MS以及GST Pull down-MS都只是一步亲和纯化,所以TAP/MS相比可以有效减少非特异性蛋白的结合,假阳性率更低。
      基本流程:构建含有目的基因的载体,使目的基因与2个不同的表位标签融合表达,如Flag、HA、Strep、His、CBP、SBP等等。安提海拉生物科技有限公司采用N端 2*strep tag+Flag tag或者C端 6*His tag+Flag tag双标签载体;载体转染细胞并表达融合蛋白“2*strep-Flag –目标蛋白”或“6*His-Flag–目标蛋白”;细胞裂解提取总蛋白,经streptactin beads或Nickelbeads和Flag M2 beads的两步纯化和洗脱,更大限度了去除了假阳性蛋白。洗脱液进入质谱仪,分析鉴定与目标蛋白具有相互作用的蛋白。

技术优势:
1、  TAP/MS得到的相互作用蛋白是在细胞内与目标蛋白结合的,符合体内真实生理情况,得到的结果可信度高。
2、该方法纯化条件温和,不会破坏弱的相互作用,故能得到更多的具有生理意义的相互作用蛋白。
3、 采用两步纯化,可以有效的减少非特异蛋白的结合,并避免因过度冲洗而产生的复合体解离。

4、有两端标签可供选择,避免某端带上标签后功能丧失,扩宽了TAP/MAS使用范围。


技术路线:

慢病毒载体信息:

实验流程图:

服务内容:
1、  构建融合N端 2*strep tag+Flag tag或者C端 6*His tag+Flag tag的目标蛋白真核表达载体或者病毒载体。
2、  载体瞬时转染靶细胞或包装病毒感染靶细胞。
3、  Strep-Flag或6*His-Flag两步分别纯化目标蛋白复合体。
4、  LC-MS-MS鉴定与目标蛋白相互作用的已知或未知蛋白。

服务项目

客户提供

交付产物

TAP/MS-瞬转

1、目标基因的名称、序列、物种等相关信息或者目标基因的克隆产物
2、待研究的细胞

1、带有目标基因和双标签的真核表达载体
2、相互作用蛋白的质谱鉴定结果

TAP/MS-稳转

1、目标基因的名称、序列、物种等相关信息或者目标基因的克隆产物
2、待研究的细胞

1、带有目标基因和双标签的病毒表达载体
2、相互作用蛋白的质谱鉴定结果

3、稳定转染的细胞株



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